海贼王中路飞与伙伴“分开”有几个关键节点，需要看你说的是哪一次：

1. 第一次真正意义上的团队分散：第405集左右（恐怖三桅帆船篇结尾～香波地群岛篇）
   在香波地群岛，草帽一伙被熊（巴索罗米·熊）逐个拍飞，团队被迫分散，动画中这发生在第405集前后（具体是第405集结尾开始到第407集左右），这是路飞第一次和所有伙伴“分开”。

   

2. 如果指路飞与伙伴正式分头行动、开始修行：第516集左右
   顶上战争后，路飞通过雷利的建议决定修行两年，与伙伴约定两年后重聚，动画中第516集左右是路飞与伙伴（通过报纸/约定）分开修行的节点。

3. 如果指路飞和特定伙伴分开（比如和索隆、娜美等单独分开）
   那要更早，比如第3集路飞和索隆分开行动、第5集遇到娜美后分开等，属于日常剧情。

最常被问的“草帽一伙被熊拍飞、团队被迫分开”是动画第405集左右。
如果你问的是“路飞和伙伴们分开两年修行”，则是第516集左右。